Plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXC2 (m): sc-420370

Présentation

Foxc2 code le facteur de transcription de la famille forkhead box FOXC2, un régulateur se liant à l’ADN qui coordonne des programmes d’expression génique contrôlant l’identité des cellules mésenchymateuses, le développement vasculaire et lymphatique, ainsi que le remodelage du tissu adipeux chez la souris. FOXC2 agit au sein de réseaux transcriptionnels nucléaires qui croisent des voies de signalisation du développement telles que TGF-β et Notch, influençant la différenciation endothéliale, l’organisation de la matrice extracellulaire et des processus de type transition épithélio-mésenchymateuse. Une activité altérée de FOXC2 a été associée à une lymphangiogenèse dérégulée, à une mise en place vasculaire aberrante et à des modifications des états métaboliques et stromaux, fréquemment étudiées dans des modèles de troubles du développement et de biologie du microenvironnement tumoral. Ces rôles font de Foxc2 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel de la morphogenèse tissulaire et des décisions de destin cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXC2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Foxc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Foxc2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Foxc2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FOXC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Foxc2 pour l'étude de la signalisation de FOXC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Foxc2 essentiels à la fonction de FOXC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Foxc2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FOXC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FOXC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Foxc2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FOXC2 plasmide HDR (m) et le FOXC2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Foxc2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Foxc2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.