follistatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420417

概要

マウスFstはフォリスタチンをコードしており、フォリスタチンは分泌性の糖タンパク質としてTGF-βスーパーファミリーのリガンド、特にアクチビンおよび複数のBMPに結合して中和することで、SMAD2/3依存性およびSMAD1/5/8依存性の転写プログラムを調節する。リガンドの利用可能性を制限することにより、フォリスタチンは筋・生殖・代謝系にわたって、細胞運命決定、組織の成長、修復過程を形作る。Fst活性は筋形成や線維化に関連したリモデリングに影響し、アクチビン—フォリスタチンのバランス破綻は、筋萎縮、炎症シグナル、生殖に関わる表現型などの文脈で研究されている。成長因子シグナル伝達の主要な細胞外制御因子として、Fstは発生および恒常性維持回路における経路間クロストークやフィードバックを解明するための、解析しやすい介入点となる。

follistatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFst遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fst内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fstのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、follistatinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、follistatinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fst欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• follistatinの機能に不可欠なFstエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fstゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• follistatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびfollistatin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fst遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  follistatin HDRプラスミド（m）および follistatin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFstホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFst標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。