Plasmide CRISPR d'Activation (h) FKBP8: sc-403075-ACT

FKBP8 (FK506 binding protein 8), également connu sous le nom de FKBP38, est une immunophiline associée aux mitochondries et au réticulum endoplasmique (RE) qui agit comme une isomérase peptidyl‑prolyl cis–trans et comme facteur d’échafaudage, coordonnant le repliement des protéines et la signalisation. Dans les cellules humaines, FKBP8 module l’apoptose et l’homéostasie mitochondriale via des interactions avec des protéines de la famille BCL2 et participe à des voies de protéostasie, notamment les réseaux de chaperonnes et la dégradation sélective des protéines. Elle a été associée à la régulation de la signalisation mTOR et aux réponses au stress cellulaire qui influencent les décisions de survie en situation de stress métabolique ou protéotoxique. Une expression ou une fonction dérégulée de FKBP8 a été étudiée dans des contextes impliquant un contrôle anormal de l’apoptose, un dysfonctionnement mitochondrial et une altération des signalisations d’adaptation au stress, en lien avec la biologie du cancer et la recherche sur les maladies neurodégénératives.

FKBP8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FKBP8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FKBP8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FKBP8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FKBP8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FKBP8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FKBP8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FKBP8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FKBP8 dans les cellules tumorales présentant une expression de FKBP8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.