Filamin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402358

Übersicht

FLNC kodiert Filamin 2, ein großes aktinbindendes Gerüstprotein, das F‑Aktin quervernetzt und das Zytoskelett mit Membranrezeptoren sowie Signalproteinkomplexen koppelt. Filamin 2 koordiniert Mechanotransduktion, Zellform und Adhäsionsdynamik, indem es Aktinnetzwerke organisiert und mit Integrinen sowie der dazugehörigen Fokaladhäsions-Maschinerie interagiert. In quergestreifter Muskulatur unterstützt FLNC die sarkomerische und myofibrilläre Integrität und trägt zur Kraftübertragung und zu Stressantworten bei. Genetische Veränderungen von FLNC sind mit Kardiomyopathien und myofibrillären Myopathien assoziiert, wodurch es ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Zytoskelett-Remodelling und Mechanismen von Muskelerkrankungen ist.

Das Filamin 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FLNC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FLNC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FLNC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Filamin 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FLNC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Filamin 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FLNC-Exone abzielen, die für die Filamin 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FLNC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Filamin 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Filamin 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FLNC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Filamin 2 HDR-Plasmid (h) und Filamin 2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FLNC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FLNC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.