Plasmide Double Nickase (h) Filamin 1: sc-400557-NIC

FLNA code la filamine 1, une grande protéine d'échafaudage se liant à l'actine, qui réticule la F‑actine en réseaux orthogonaux et couple le cytosquelette aux récepteurs transmembranaires ainsi qu'aux complexes de signalisation. Par ses interactions avec les intégrines, les canaux ioniques et des effecteurs régulés par de petites GTPases, la filamine 1 influence le renouvellement des adhésions focales, la mécanotransduction et la polarité cellulaire lors de la migration et de l'organisation tissulaire. Le remodelage de l'actine corticale dépendant de FLNA soutient l'endocytose et le trafic vésiculaire et contribue à coordonner la signalisation Rho/Rac avec la dynamique membranaire. La perturbation ou la régulation altérée de FLNA est associée à des troubles du développement et neurovasculaires, et fait fréquemment l'objet d'études dans le contexte de la dérégulation du cytosquelette, de l'intégrité des barrières et de phénotypes liés à l'invasion.

Filamin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FLNA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FLNA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FLNA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FLNA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.