Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FIH-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-435640-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- FIH-1O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase FIH-1 (m) e o Plasmídeo Double Nickase FIH-1 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Hif1an. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:FIH-1 Anticorpo (A-5): sc-271780
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
FIH-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-435640-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FIH-1 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-435640-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene Hif1an de camundongo codifica o fator inibidor de HIF-1 (FIH-1), uma hidroxilase de asparaginil que modifica, de forma dependente de oxigênio, a HIF-1α e substratos relacionados para conter programas transcricionais induzidos por hipóxia. Ao hidroxilar uma asparagina-chave no domínio C-terminal de transativação da HIF-1α, a FIH-1 limita o recrutamento de coativadores e ajusta a expressão de genes envolvidos em angiogênese, metabolismo glicolítico, eritropoiese e adaptação celular a baixos níveis de oxigênio. Além da sinalização de HIF, a FIH-1 tem sido associada a uma regulação mais ampla de interações proteicas e respostas ao estresse por meio da hidroxilação de proteínas que contêm repetições de anquirina. O controle desregulado da via de HIF é relevante para a biologia da hipóxia tumoral, sinalização inflamatória, remodelamento metabólico e respostas teciduais relacionadas à isquemia, tornando Hif1an um nó útil para estudos mecanísticos.
FIH-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Hif1an em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Hif1an. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Hif1an. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Hif1an interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.