Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (h): sc-401978

Présentation

EFEMP1 code la fibuline‑3, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui s’associe aux fibres élastiques et à des composants de la membrane basale afin de réguler l’assemblage de la matrice, l’adhérence cellule–matrice et le remodelage tissulaire. La fibuline‑3 module l’activité des protéases et le renouvellement de la matrice extracellulaire, notamment via des interactions influençant le remodelage médié par les MMP/ADAMTS, et elle a été associée à des contextes de signalisation tels que TGF‑β/SMAD, qui coordonnent la fibrose et les programmes épithélio‑mésenchymateux. Dans les tissus humains, l’expression d’EFEMP1 est impliquée dans l’homéostasie vasculaire et oculaire, et des niveaux altérés de fibuline‑3 ont été associés à des phénotypes de dégénérescence rétinienne ainsi qu’à des modifications de l’architecture stromale en biologie des cancers. Ces rôles font d’EFEMP1 un point d’entrée utile pour étudier la régulation de la matrice extracellulaire, les réseaux de protéines sécrétées et les comportements cellulaires dépendants du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EFEMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EFEMP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EFEMP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fibulin-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EFEMP1 pour l'étude de la signalisation de Fibulin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EFEMP1 essentiels à la fonction de Fibulin-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EFEMP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fibulin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Fibulin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EFEMP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fibulin-3 plasmide HDR (h) et le Fibulin-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EFEMP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EFEMP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.