Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401978

概要

EFEMP1はフィブリン-3（fibulin-3）をコードしており、フィブリン-3は分泌型の細胞外マトリックス糖タンパク質として、弾性線維や基底膜成分と会合し、マトリックスの組み立て、細胞―マトリックス接着、ならびに組織リモデリングの制御に関与します。フィブリン-3はプロテアーゼ活性および細胞外マトリックスのターンオーバーを調節し、MMP/ADAMTS介在性リモデリングに影響する相互作用などにも関与します。また、線維化や上皮―間葉プログラムを協調させるTGF-β/SMADなどのシグナル伝達コンテキストとの関連も示されています。ヒト組織では、EFEMP1の発現は血管および眼の恒常性と関連しており、フィブリン-3量の変化は網膜変性様の表現型や、がん生物学における間質構築の変化と関連づけられてきました。これらの役割から、EFEMP1は細胞外マトリックス制御、分泌タンパク質ネットワーク、ならびに微小環境依存的な細胞挙動を研究する上で有用な切り口となります。

Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEFEMP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EFEMP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EFEMP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fibulin-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fibulin-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EFEMP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fibulin-3の機能に不可欠なEFEMP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EFEMP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFibulin-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EFEMP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fibulin-3 HDRプラスミド（h）および Fibulin-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEFEMP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEFEMP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。