FGF-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400324-ACT

O FGF2 humano codifica o fator de crescimento de fibroblastos 2 (FGF-2), um mitógeno ligante de heparina que regula a proliferação, a sobrevivência, a migração e a diferenciação celular em linhagens mesenquimais e neurais. O FGF-2 sinaliza principalmente por meio de tirosina quinases FGFR para ativar programas associados a MAPK/ERK, PI3K/AKT, PLCγ e STAT, coordenando a angiogênese, a remodelação tecidual e a dinâmica da matriz extracelular. A expressão desregulada de FGF2 ou a atividade da via de FGFR está implicada em vascularização aberrante, fibrose e redes de sinalização oncogênica, sendo frequentemente estudada em contextos como interações tumor–estroma e neuroinflamação. Como fator de crescimento pleiotrópico, o FGF-2 oferece um eixo tratável para investigar crosstalk entre receptores, alterações de estado transcricional e sinalização parácrina em sistemas de cultura complexos.

FGF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-2 em células tumorais com expressão de FGF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.