FGF-10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417825-ACT

FGF10は線維芽細胞増殖因子10（FGF-10）をコードしており、分泌型のパラクラインリガンドとして主にFGFR2bを介してシグナルを伝達し、器官形成および成体組織の恒常性維持における上皮―間葉クロストークを制御します。FGF-10は、RAS–MAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγなどの代表的な受容体型チロシンキナーゼ経路を活性化し、増殖、遊走、生存、ならびに分岐形態形成を調節します。FGF10–FGFR2bシグナルの制御破綻は、肺や腺組織の異常発生、創傷修復不全、先天性疾患やがん生物学に関連する上皮増殖プログラムの変容に関与するとされています。発生モルフォゲンおよびニッチ因子として、FGF-10は気道上皮、乳腺・唾液腺の生物学、ならびに間質―上皮シグナル伝達モデルで一般的に研究されています。

FGF-10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FGF10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FGF-10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FGF10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFGF10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FGF-10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFGF10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFGF-10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFGF10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFGF-10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。