ferritin light chain Double Nickaseプラスミド (h): sc-400924-NIC

FTL はフェリチン軽鎖をコードしており、過剰な二価鉄（Fe²⁺）を隔離して鉄触媒による酸化傷害を抑える、細胞質フェリチン複合体の中核サブユニットです。不安定鉄（labile iron）の利用可能量を制御することで、FTL は鉄恒常性やレドックスバランスを支えるとともに、ミトコンドリア代謝、DNA 合成、ストレス応答などの下流過程にも関与します。フェリチンの動態は、フェロトーシス感受性を規定する経路、炎症性シグナル伝達、ならびにフェリチンのオートファジー分解（フェリチノファジー）と交差しており、栄養ストレスや酸化ストレス下での細胞適応において FTL を結び付けます。FTL の発現変動やフェリチン制御の変化は、鉄過剰負荷状態、神経変性過程、感染生物学、がん細胞代謝に関する研究で、分子指標としてしばしば用いられます。

ferritin light chain ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FTL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FTL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FTLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FTLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。