Plasmide CRISPR d'Activation (m) FBXO3: sc-425412-ACT

Le gène murin *Fbxo3* code la protéine FBXO3, un récepteur de substrats de type F-box au sein des complexes ubiquitine‑ligase E3 SCF (SKP1–CUL1–F-box), qui contribue à conférer la spécificité du renouvellement protéasomal dépendant de l’ubiquitine. Par la dégradation régulée de protéines de signalisation, FBXO3 participe au contrôle de voies inflammatoires et de réponse au stress, notamment la signalisation de l’immunité innée et la production de cytokines. Une activité altérée de FBXO3 a été associée à une inflammation dérégulée et à des perturbations de l’homéostasie immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des infections, des phénotypes inflammatoires chroniques et des seuils de signalisation spécifiques de certains types cellulaires. En tant qu’élément des circuits du système ubiquitine‑protéasome, *Fbxo3* est également utile pour explorer comment la stabilité des protéines s’intègre aux programmes transcriptionnels et à la régulation post‑traductionnelle.

FBXO3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fbxo3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FBXO3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fbxo3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fbxo3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FBXO3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fbxo3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FBXO3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FBXO3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Fbxo3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.