FBL8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406696

概要

FBXL8（FBL8）は、SCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体において基質認識を担う構成要素として機能すると予測されるF-boxタンパク質をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質分解（ターンオーバー）を支えると考えられます。クライアントタンパク質を選択的にユビキチン化することにより、FBXL8は細胞周期の進行、シグナル伝達、ストレス応答を形作るプロテオスタシス制御プログラムに影響を与えうる位置づけにあります。F-box介在性のユビキチンリガーゼ活性が乱れると、チェックポイント制御や経路ダイナミクスが変化し、がん化などの腫瘍性形質転換やその他の増殖性疾患に関連する可能性があります。したがってFBXL8は、標的分解が細胞の恒常性や疾患関連シグナルネットワークとどのように接続しているかを調べるうえで有用な結節点となります。

FBL8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFBXL8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FBXL8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FBXL8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FBL8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FBL8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FBXL8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FBL8の機能に不可欠なFBXL8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FBXL8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FBL8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFBL8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FBXL8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FBL8 HDRプラスミド（h）および FBL8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFBXL8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFBXL8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。