Plasmide CRISPR/Cas9 KO FADS6 (m): sc-435879

Présentation

La désaturase des acides gras 6 (FADS6) est une enzyme associée aux membranes impliquée dans l’introduction de doubles liaisons dans les acides gras polyinsaturés, influençant la composition lipidique et la signalisation lipidique en aval. En modulant les réservoirs d’acides gras et de dérivés bioactifs, FADS6 peut affecter la fluidité membranaire, la fonction des organites et l’homéostasie métabolique dans les cellules et tissus de souris. L’activité liée à Fads6 s’inscrit dans des réseaux plus larges de désaturation et d’élongation des acides gras, qui coordonnent l’équilibre énergétique et la disponibilité des médiateurs de l’inflammation. La dérégulation des voies lipidiques associées aux désaturases est fréquemment étudiée dans le contexte du stress métabolique, de l’accumulation lipidique hépatique, des besoins lipidiques du neurodéveloppement et des phénotypes inflammatoires dans des modèles précliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FADS6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fads6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fads6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fads6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FADS6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fads6 pour l'étude de la signalisation de FADS6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fads6 essentiels à la fonction de FADS6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fads6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FADS6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FADS6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fads6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FADS6 plasmide HDR (m) et le FADS6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fads6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fads6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.