EXOSC10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404272-ACT

O EXOSC10 humano codifica uma exorribonuclease catalítica 3′–5′ que atua como componente central do exossomo de RNA, dando suporte à vigilância e ao processamento de RNA tanto no núcleo quanto no citoplasma. O EXOSC10 contribui para a maturação e a degradação de diversas classes de RNA, incluindo rRNA, sn/snoRNA e transcritos instáveis ou aberrantes, influenciando assim a biogênese de ribossomos, o controle de qualidade de RNA e a homeostase da expressão gênica. Por meio dessas atividades, o EXOSC10 se conecta a vias relacionadas à função nucleolar, ao metabolismo de RNA e às respostas celulares ao estresse. A desregulação do processamento de RNA associado ao exossomo tem sido associada a desequilíbrios do transcriptoma em escala genômica e a fenótipos relevantes para doenças, tornando o EXOSC10 um alvo útil para estudos mecanísticos de degradação de RNA e de regulação adjacente à proteostase.

EXOSC10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EXOSC10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EXOSC10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EXOSC10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EXOSC10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EXOSC10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EXOSC10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EXOSC10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EXOSC10 em células tumorais com expressão de EXOSC10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.