Plasmide CRISPR d'Activation (h) ESM-1: sc-403120-ACT

ESM1 code la molécule 1 spécifique des cellules endothéliales (ESM-1/endocan), un protéoglycane à dermatane sulfate sécrété, exprimé principalement par l’endothélium vasculaire et induit par des cytokines inflammatoires. ESM-1 module l’activation endothéliale en influençant les interactions leucocytes–endothélium, la perméabilité vasculaire et la signalisation associée à la matrice extracellulaire, à l’interface des voies angiogéniques et inflammatoires. Elle a été associée à l’angiogenèse liée aux tumeurs et au remodelage vasculaire inflammatoire, et son expression est corrélée à une dysfonction endothéliale dans de nombreux contextes pathologiques. Ces caractéristiques font d’ESM1 un levier moléculaire utile pour étudier la biologie de l’endothélium, le dialogue avec le microenvironnement et des biomarqueurs d’activation vasculaire dans des systèmes cellulaires humains.

ESM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ESM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ESM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ESM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ESM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ESM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ESM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ESM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ESM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ESM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.