Erythropoietin/EPO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400283

Visão geral

O gene **EPO** codifica a eritropoietina, um hormônio glicoproteico secretado que regula a sobrevivência, a proliferação e a diferenciação de progenitores eritroides, principalmente por meio da sinalização **JAK2/STAT5** mediada pelo **EPOR**, com contribuição adicional das vias **PI3K/AKT** e **MAPK**. Na fisiologia do adulto, a produção de EPO é rigidamente controlada pela detecção de oxigênio por programas transcricionais mediados por **HIF**, conectando a hipóxia à homeostase sistêmica das hemácias. A atividade desregulada do eixo **EPO/EPOR** é relevante para os mecanismos subjacentes à anemia e às respostas associadas à hipóxia, e é frequentemente avaliada como parte de estudos mais amplos sobre metabolismo do ferro, inflamação e oxigenação tecidual. Como a EPO é um fator secretado, sua regulação gênica e os efeitos de sinalização a jusante também são leituras úteis para controle transcricional, comunicação cruzada de sinalização por citocinas e adaptação celular ao estresse por baixa disponibilidade de oxigênio.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Erythropoietin/EPO (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EPO em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EPO, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EPO na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Erythropoietin/EPO.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EPO para a investigação da sinalização de Erythropoietin/EPO, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EPO críticos para a função Erythropoietin/EPO
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EPO para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Erythropoietin/EPO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Erythropoietin/EPO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EPO. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Erythropoietin/EPO Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Erythropoietin/EPO (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EPO para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EPO definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.