ErbB2/HER2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420218-ACT

O gene **Erbb2** de camundongo codifica a tirosina-quinase receptora **ErbB2/HER2**, um membro da família **EGFR/ErbB** que atua como parceiro preferencial de heterodimerização para amplificar a sinalização por fatores de crescimento. Após a ativação, o ErbB2 aciona as vias **MAPK/ERK** e **PI3K–AKT** para regular proliferação, sobrevivência, metabolismo e diferenciação, com efeitos adicionais sobre adesão e motilidade celulares. No epitélio mamário e em outros tecidos, a sinalização de ErbB2 contribui para o padrão de desenvolvimento e a homeostase tecidual, e sua desregulação é amplamente utilizada como modelo de sinalização oncogênica e de tráfego receptor alterado. Como o ErbB2 não possui um ligante solúvel conhecido, sua atividade é frequentemente estudada por meio de mudanças nos níveis de expressão, na composição de dímeros e em redes de fosforilação a jusante.

ErbB2/HER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Erbb2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ErbB2/HER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Erbb2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Erbb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ErbB2/HER2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Erbb2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ErbB2/HER2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ErbB2/HER2 em células tumorais com expressão de Erbb2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.