Plasmide Double Nickase (h) ERAB: sc-405211-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ERAB correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ERAB Double Nickase (h) et le plasmide ERAB Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSD17B10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ERAB Antibody (E-10): sc-393693
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ERAB | sc-405211-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ERAB | sc-405211-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD17B10 code ERAB, une enzyme mitochondriale multifonctionnelle également connue sous le nom de 17β‑hydroxystéroïde déshydrogénase de type 10, qui participe au catabolisme des acides gras à chaîne courte et des acides aminés. ERAB est un composant du complexe mitochondrial RNase P, contribuant à la maturation des ARNt ainsi qu’à l’expression génique mitochondriale au sens large et à la phosphorylation oxydative. Par ses rôles dans le métabolisme mitochondrial et la protéostasie, ERAB influence l’équilibre rédox et l’homéostasie énergétique cellulaire dans les tissus à forte activité métabolique. Une altération de la fonction de HSD17B10/ERAB a été associée à une dysfonction mitochondriale et à des phénotypes en lien avec la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible utile pour étudier les mécanismes couplant le métabolisme mitochondrial aux réponses cellulaires au stress.
ERAB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSD17B10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSD17B10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSD17B10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSD17B10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.