Eps8L3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413175-ACT

EPS8L3 codifica a Eps8L3, um membro da família EPS8-like de proteínas reguladoras de actina, que conecta sinais de entrada à remodelação dinâmica do citoesqueleto cortical de actina. Por meio de interações com complexos associados à actina, a Eps8L3 está implicada no controlo da formação de “ruffles” na membrana, de alterações na forma celular e da motilidade — processos que coordenam programas de adesão e migração. Estas funções do citoesqueleto ligam a EPS8L3 a vias a jusante de recetores tirosina-quinase e de GTPases da família Rho, que integram sinais extracelulares com a formação de protrusões. A regulação alterada da dinâmica da actina e do comportamento migratório é amplamente relevante em modelos de invasão e metastização de células cancerígenas, tornando a EPS8L3 um alvo útil para estudos mecanísticos de fenótipos dependentes do citoesqueleto.

Eps8L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EPS8L3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Eps8L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EPS8L3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EPS8L3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Eps8L3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EPS8L3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Eps8L3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Eps8L3 em células tumorais com expressão de EPS8L3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.