EphB2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420199

概要

Ephb2は、隣接する細胞同士の接触依存的な情報伝達を媒介するエフリン–Ephシグナル伝達系に属する受容体型チロシンキナーゼEphB2をコードします。膜結合型のエフリンBリガンドに結合すると、EphB2は双方向性シグナル伝達を誘導し、細胞骨格の再構築、細胞接着、方向性移動を制御します。特に、軸索誘導、シナプスの組織化、組織境界の形成において重要な役割を担います。マウスモデルでは、EphB2依存的シグナルは神経回路の構築や血管パターニングに影響し、細胞の位置取りの変化や浸潤的挙動を伴う表現型との関連が示されています。EphB2活性の制御異常は、発生異常や、運動性および区画化を制御するがん関連経路の文脈でしばしば研究されています。

EphB2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEphb2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ephb2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ephb2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EphB2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EphB2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ephb2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EphB2の機能に不可欠なEphb2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ephb2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EphB2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEphB2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ephb2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EphB2 HDRプラスミド（m）および EphB2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEphb2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEphb2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。