EphA7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401722-ACT

EPHA7 codifica a EphA7, um membro da família de receptores tirosina-quinase de efrinas que medeia sinalização dependente de contato entre células adjacentes. A EphA7 participa da sinalização bidirecional Eph/efrina para regular a remodelação do citoesqueleto, a adesão celular e a migração direcional, com funções estabelecidas na padronização de tecidos e no desenvolvimento neural. Os desfechos das vias a jusante frequentemente convergem com a sinalização de GTPases da família Rho e com programas associados a MAPK/ERK e PI3K/AKT, que influenciam proliferação e sobrevivência. Alterações na expressão ou na sinalização de EPHA7 foram relatadas em diversos tipos de câncer e em contextos do neurodesenvolvimento, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de invasão, diferenciação e comunicação célula–célula.

EphA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EPHA7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EphA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EPHA7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EPHA7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EphA7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EPHA7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EphA7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EphA7 em células tumorais com expressão de EPHA7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.