EphA5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403104-NIC

EPHA5は、隣接細胞間の接触依存的なコミュニケーションを制御するエフリンAシグナル伝達系に属する受容体型チロシンキナーゼEphA5をコードする。EphA5は、細胞骨格の再編成、接着、エンドサイトーシス輸送に影響する双方向性シグナル伝達を介して、軸索誘導、シナプス形成、神経回路の洗練化を調節する。Eph受容体に一般的に関連づけられる下流経路としては、RhoファミリーGTPアーゼ、MAPK/ERK、PI3K関連のシグナル伝達ノードなどがあり、これらは遊走や神経突起ダイナミクスに関わるシグナルを統合する。EPHA5の制御異常やエフリン経路のバランス破綻は、神経発達に関わる表現型と関連するほか、浸潤や細胞間境界の形成といった腫瘍化プロセスにおける文脈依存的な役割とも関連づけられており、神経モデルおよびがんモデルの双方で機構研究を支持する。

EphA5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EPHA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EPHA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EPHA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EPHA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。