EphA4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400729-NIC

EPHA4 codifica o EphA4, um receptor tirosina-quinase da família Eph/ephrin que medeia sinalização dependente de contacto, importante para a orientação de axónios, a plasticidade sináptica e a formação de fronteiras teciduais. Após a ligação a ligandos ephrin, o EphA4 desencadeia sinalização bidirecional que modula a remodelação do citoesqueleto, a adesão celular e a migração por vias que envolvem GTPases da família Rho, cascatas de MAPK e sinalização associada à PI3K. Na biologia humana, alterações na sinalização do EphA4 têm sido associadas a conectividade neuronal desregulada e programas aberrantes de motilidade celular relevantes em contextos do neurodesenvolvimento e de doenças neurodegenerativas, bem como a fenótipos ligados à invasão em modelos de cancro. Estas características fazem do EPHA4 um nó útil para estudar a comunicação cruzada entre recetores tirosina-quinase, a dinâmica da sinalização dependente de ligando e os mecanismos de comunicação célula–célula.

EphA4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EPHA4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EPHA4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EPHA4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EPHA4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.