envoplakin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405420-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- envoplakinO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase envoplakin (h) e o Plasmídeo Double Nickase envoplakin (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EVPL. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:envoplakin Anticorpo (F-4): sc-137033
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
envoplakin Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405420-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
envoplakin Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405420-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EVPL codifica a envoplaquina, um cito-linker da família das plaquinas que contribui para o envelope córneo e para as redes de proteínas associadas aos desmossomos em epitélios estratificados. A envoplaquina integra filamentos intermediários a complexos juncionais para sustentar a diferenciação de queratinócitos, a formação da barreira e a resistência mecânica, atuando na interface entre a organização do citoesqueleto e os processos de adesão célula–célula. Alterações na expressão de EVPL ou a perturbação da montagem do envelope têm sido associadas à fragilidade epitelial e a programas anormais de diferenciação, tornando EVPL um marcador útil e um ponto de entrada mecanístico para o estudo da homeostase da pele e das mucosas. Em biologia do câncer, a envoplaquina e componentes relacionados do envelope são frequentemente examinados no contexto do remodelamento epitelial e da adesão desregulada durante a progressão tumoral.
envoplakin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EVPL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EVPL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EVPL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EVPL interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.