ENDOG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420176

概要

Endog は、ミトコンドリアヌクレアーゼであるエンドヌクレアーゼG（ENDOG）をコードしており、ミトコンドリアDNA代謝や、細胞ストレス時における核酸の制御された分解に関与するとされています。ENDOG は、アポトーシス様のDNA断片化に関連する経路、ミトコンドリアゲノムの維持、さらに酸化的リン酸化や活性酸素種（ROS）シグナルに影響し得る、より広範なミトコンドリア恒常性の維持にも関与します。ENDOG 活性の変化は、ミトコンドリア機能およびゲノム完全性の破綻と関連づけられており、これらの過程は神経変性、心血管・代謝機能障害、炎症性ストレスのモデルにおいて重要です。マウス系では、Endog はミトコンドリアから核への情報伝達や、ストレス応答性の細胞運命決定を解析するための扱いやすい標的（ノード）となります。

ENDOG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEndog遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Endog内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Endogのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ENDOGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ENDOGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Endog欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ENDOGの機能に不可欠なEndogエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Endogゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ENDOG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびENDOG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Endog遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ENDOG HDRプラスミド（m）および ENDOG HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEndogホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEndog標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。