Emx2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420170-ACT

Emx2はホメオボックス型転写因子をコードし、マウス胚発生において背側終脳のアイデンティティ確立と大脳皮質の領域化（arealization）を促進しながら、前駆細胞の増殖、神経細胞への分化、領域パターニングを協調的に制御する。Emx2は、モルフォゲンや増殖因子のシグナルを統合する遺伝子制御ネットワークの一部として機能し、WNT/β-カテニン、FGF、SHHシグナルとの相互作用を介して前脳の発生や中脳—後脳境界（MHB）の形成に関与する。成体組織においてもEmx2は神経幹細胞の動態や回路特異性の決定に寄与し、その発現量は神経発達表現型や皮質構造の変化と関連づけられている。EMX2の発現異常は発達性脳奇形と関連して報告されており、腫瘍生物学や上皮系統のプログラムという観点からも研究されていることから、転写制御と細胞運命決定の機構解析において重要な標的である。

Emx2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Emx2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Emx2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Emx2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEmx2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Emx2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEmx2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEmx2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEmx2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEmx2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。