Emx1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402711-ACT

EMX1は、ホメオボックス型転写因子Emx1をコードしており、DNA結合性の転写調節因子として、ヒト前脳および大脳皮質の発生過程における領域アイデンティティの規定や神経系細胞系列（リネージ）プログラムの確立に寄与します。Emx1は、前駆細胞の増殖、神経細胞への分化、移動を制御する遺伝子ネットワークに影響し、Wnt、FGF、Notchなどの発生シグナル伝達経路と統合的に作用して、神経上皮のパターニングを形成します。EMX1に関連する転写プログラムの制御異常は、神経発生の軌跡の変化と関連づけられており、EMX1は皮質回路形成や細胞運命決定の機構を研究するうえで有用な遺伝子座です。生物医学研究においては、EMX1は、エンハンサー—プロモーター制御、クロマチン状態ダイナミクス、ならびに神経系における系譜制限的な遺伝子発現を解析するためのモデル転写因子として利用されています。

Emx1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EMX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Emx1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EMX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEMX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Emx1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEMX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEmx1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEMX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEmx1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。