Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Elongin A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404668
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Elongin A CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してElongin Aゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Elongin A 抗体 (A-5): sc-373811
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Elongin A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-404668 | 20 µg | $397.00 |
概要
ELOAはElongin Aをコードしており、RNAポリメラーゼII（RNA polymerase II）のプロセシビティを高めて産生的なmRNA合成の協調を助けるElongin転写伸長複合体の中核構成要素です。Elongin Aはまた、転写共役型のユビキチンリガーゼ複合体の形成にも関与し、伸長制御をタンパク質分解（ターンオーバー）や細胞ストレス応答と結び付けます。これらの役割を通じて、ELOAは増殖、DNA損傷応答、ならびにプロテオトキシックな条件への適応を司る遺伝子発現プログラムに影響を与えます。転写伸長やユビキチン介在性調節の破綻は、がんおよび神経発達関連の表現型で繰り返し見られる特徴であり、ELOAはこれらの経路を機構的に研究する上で有用な結節点となります。
Elongin A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるELOA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ELOA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ELOAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Elongin Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、Elongin Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ELOA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- Elongin Aの機能に不可欠なELOAエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、ELOAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- Elongin A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびElongin A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ELOA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
Elongin A HDRプラスミド（h）および Elongin A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはELOAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のELOA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。