Plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin A (h): sc-404668

Présentation

ELOA code pour Elongin A, un composant central du complexe d’élongation transcriptionnelle Elongin, qui augmente la processivité de l’ARN polymérase II et contribue à coordonner une synthèse productive d’ARNm. Elongin A participe également à des complexes de type ligase ubiquitine couplés à la transcription, reliant le contrôle de l’élongation au renouvellement des protéines et aux réponses cellulaires au stress. Par ces fonctions, ELOA influence des programmes d’expression génique régissant la prolifération, les réponses aux dommages de l’ADN et l’adaptation à des conditions protéotoxiques. La dérégulation de l’élongation transcriptionnelle et de la régulation médiée par l’ubiquitine constitue une caractéristique récurrente dans les cancers et certains phénotypes neurodéveloppementaux, faisant d’ELOA un nœud pertinent pour des études mécanistiques de ces voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELOA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELOA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELOA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Elongin A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELOA pour l'étude de la signalisation de Elongin A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELOA essentiels à la fonction de Elongin A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELOA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Elongin A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Elongin A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELOA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Elongin A plasmide HDR (h) et le Elongin A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELOA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELOA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.