Plasmide CRISPR/Cas9 KO ELL3 (h): sc-405835

Présentation

ELL3 (eleven-nineteen lysine-rich leukemia gene 3) code une protéine apparentée à un facteur d’élongation de la transcription, appartenant à la famille ELL, qui interagit avec l’ARN polymérase II afin d’influencer l’élongation productive et la quantité de transcrits produite. Bien que moins bien caractérisé que d’autres paralogues ELL, ELL3 est impliqué dans la régulation de programmes d’expression génique liés à l’identité cellulaire, à la différenciation et au calendrier du développement, via la modulation de la dynamique transcriptionnelle. Un contrôle altéré de l’élongation et du traitement de l’ARN constitue une caractéristique récurrente des dérégulations oncogéniques et développementales, ce qui fait d’ELL3 une cible pertinente pour étudier comment la machinerie transcriptionnelle contribue à une expression génique aberrante. Dans les cellules humaines, l’étude de la fonction d’ELL3 peut éclairer un contrôle transcriptionnel spécifique au contexte et ses liens potentiels avec des signatures d’expression associées aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ELL3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ELL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ELL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ELL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ELL3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ELL3 pour l'étude de la signalisation de ELL3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ELL3 essentiels à la fonction de ELL3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ELL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ELL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ELL3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ELL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ELL3 plasmide HDR (h) et le ELL3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ELL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ELL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.