Plásmido Doble Nickase (h) Elk-1: sc-400385-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Elk-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Elk-1 (h) y el plásmido de doble nickasa Elk-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ELK1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Elk-1 Anticuerpo (E-5): sc-365876
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Elk-1 | sc-400385-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Elk-1 | sc-400385-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELK1 codifica el factor de transcripción Elk-1 con dominio ETS, un efector nuclear de la señalización MAPK/ERK que conecta señales extracelulares de factores de crecimiento y de estrés con respuestas transcripcionales rápidas. Tras su fosforilación por ERK, JNK o p38, Elk-1 coopera con el factor de respuesta al suero (SRF) en elementos de respuesta al suero para regular genes de respuesta inmediata que controlan la proliferación, la diferenciación, la plasticidad neuronal y la apoptosis. La actividad desregulada de ELK1 se ha asociado con programas de señalización oncogénica y con procesos inflamatorios y neurodegenerativos aberrantes, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la transcripción dependiente de estímulos y la remodelación de la cromatina. En células humanas, Elk-1 también integra la comunicación cruzada entre vías de quinasas con el control transcripcional proximal al promotor, lo que respalda estudios mecanísticos de la transducción de señales y de las redes reguladoras génicas.
Elk-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELK1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.