EG-VEGF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404774-ACT

PROK1 codifica o VEGF derivado de glândulas endócrinas (EG-VEGF), uma citocina pró-angiogénica secretada que sinaliza principalmente através dos recetores acoplados à proteína G PROKR1 e PROKR2 para regular a migração de células endoteliais, a permeabilidade e a remodelação vascular. O EG-VEGF apresenta atividade seletiva por tecido e contribui para a especialização vascular endócrina e reprodutiva, ligando sinais extracelulares a programas de sinalização a jusante dependentes de MAPK/ERK, PI3K/AKT e cálcio. Na biologia humana, a desregulação da sinalização de PROK1 tem sido associada a angiogénese aberrante e a alterações no microambiente inflamatório, tornando-a um nó útil para estudar a regulação do nicho vascular. Esta via é frequentemente examinada em contextos em que a comunicação endotélio–estroma e programas transcricionais responsivos ao oxigénio ou a citocinas influenciam a remodelação tecidular.

EG-VEGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PROK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EG-VEGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PROK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PROK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EG-VEGF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PROK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EG-VEGF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EG-VEGF em células tumorais com expressão de PROK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.