Plasmide CRISPR d'Activation (h) EG-VEGF: sc-404774-ACT

PROK1 code pour le VEGF dérivé des glandes endocrines (EG-VEGF), une cytokine pro-angiogénique sécrétée qui signale principalement via les récepteurs couplés aux protéines G PROKR1 et PROKR2 afin de réguler la migration des cellules endothéliales, la perméabilité et le remodelage vasculaire. L’EG-VEGF présente une activité sélective selon les tissus et contribue à la spécialisation vasculaire des tissus endocriniens et reproducteurs, en reliant des signaux extracellulaires à des programmes de signalisation en aval dépendant des voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et du calcium. En biologie humaine, une dérégulation de la signalisation de PROK1 a été associée à une angiogenèse aberrante et à des modifications du microenvironnement inflammatoire, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la régulation de la niche vasculaire. Cette voie est fréquemment étudiée dans des contextes où la communication endothélio-stromale et des programmes transcriptionnels sensibles à l’oxygène ou aux cytokines influencent le remodelage tissulaire.

EG-VEGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PROK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EG-VEGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PROK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PROK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EG-VEGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PROK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EG-VEGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EG-VEGF dans les cellules tumorales présentant une expression de PROK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.