Ect2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401538-ACT

ヒトECT2は、上皮細胞形質転換因子2（Ect2）をコードしており、Ect2はRhoA、Rac1、Cdc42を活性化するRhoグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）として、アクチン再編成と細胞質分裂を協調的に制御します。Ect2は細胞周期に応じて動的に調節され、核および有糸分裂期の構造体に局在して、分裂溝の形成、紡錘体関連シグナル伝達、ならびに上皮極性の維持を制御します。Rho GTPaseシグナル伝達を介して、Ect2は細胞移動、接着、増殖などの過程に影響を及ぼし、これらはゲノム安定性や有糸分裂の忠実性を司る経路とも交差します。ECT2の発現や活性の異常は腫瘍化に伴う形質転換表現型と関連することが示されており、腫瘍細胞の浸潤や異常な細胞分裂の文脈で頻繁に研究されています。

Ect2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ECT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ect2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ECT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はECT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ect2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のECT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEct2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびECT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEct2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。