ECE-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402379-NIC

ECE1 kodiert das Endothelin‑konvertierende Enzym 1 (ECE‑1), eine membrangebundene Zink‑Metalloprotease, die Big‑Endotheline spaltet und so bioaktive Endothelin‑Peptide erzeugt, wodurch die Signalübertragung über Endothelinrezeptoren mitgeprägt wird. Durch die Regulation der endothelinvermittelten Vasokonstriktion, der Endothelfunktion und des Tonus der glatten Muskulatur trägt ECE‑1 zu Signalwegen bei, die die vaskuläre Homöostase und Entzündungsreaktionen steuern. ECE‑1 ist außerdem an der extrazellulären Peptidprozessierung in sekretorischen und endosomalen Systemen beteiligt und beeinflusst dadurch die lokale Peptidverfügbarkeit sowie die Dynamik der Rezeptoraktivierung. Eine veränderte ECE1‑Aktivität oder ‑Expression wurde in mehreren Modellsystemen mit Phänotypen des kardiovaskulären und pulmonal‑vaskulären Remodelings, mit renaler und metabolischer Dysregulation sowie mit Signalgebung im tumorassoziierten Mikromilieu in Verbindung gebracht.

ECE-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ECE1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ECE1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ECE1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ECE1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.