Plasmide Double Nickase (h) E2F-3: sc-400934-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) E2F-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide E2F-3 Double Nickase (h) et le plasmide E2F-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant E2F3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: E2F-3 Antibody (PG30): sc-56665
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) E2F-3 | sc-400934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) E2F-3 | sc-400934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
E2F3 code le facteur de transcription humain E2F-3, un régulateur central de la progression du cycle cellulaire qui contrôle l’expression des gènes nécessaires à la transition G1/S, à la réplication de l’ADN et à l’entrée en phase S. L’activité d’E2F-3 est modulée par l’axe RB/E2F, qui intègre les signaux mitogènes au contrôle des points de contrôle (checkpoints) afin de coordonner la prolifération et le maintien de l’intégrité du génome. Par le biais de programmes transcriptionnels liés aux cyclines, aux facteurs d’initiation/licensing de la réplication et aux composants de la réparation de l’ADN, E2F-3 influence la croissance cellulaire, la sénescence et l’apoptose en situation de stress. La dérégulation de l’expression d’E2F3 ou du contrôle de la voie RB en amont est fréquemment associée à des phénotypes de prolifération aberrante et est étudiée dans le contexte de la signalisation oncogénique et de l’altération des réseaux suppresseurs de tumeurs.
E2F-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus E2F3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de E2F3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de E2F3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de E2F3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.