Plasmide CRISPR/Cas9 KO E-Selectin/CD62E/SELE (h): sc-400452

Présentation

SELE code pour l’E‑sélectine (CD62E), une molécule d’adhérence des cellules endothéliales inductible, rapidement surexprimée sous l’effet de cytokines inflammatoires telles que le TNF‑α et l’IL‑1β. En se liant à des ligands sialylés et fucosylés (dont le sialyl‑Lewis^x) présents à la surface des leucocytes, l’E‑sélectine médie l’accrochage initial et le roulement sur un endothélium activé, amorçant la cascade d’adhérence leucocytaire et la migration transendothéliale. La fonction de SELE s’articule avec la signalisation inflammatoire pilotée par NF‑κB et régule le recrutement vasculaire des leucocytes, qui façonne l’inflammation tissulaire et la surveillance immunitaire. Une expression dérégulée de l’E‑sélectine est associée à des états inflammatoires chroniques et à des pathologies vasculaires, et elle est fréquemment étudiée dans les interactions tumeur–endothélium et dans des modèles d’extravasation pertinents pour la métastase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO E-Selectin/CD62E/SELE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SELE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SELE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SELE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine E-Selectin/CD62E/SELE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SELE pour l'étude de la signalisation de E-Selectin/CD62E/SELE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SELE essentiels à la fonction de E-Selectin/CD62E/SELE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SELE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le E-Selectin/CD62E/SELE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le E-Selectin/CD62E/SELE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SELE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le E-Selectin/CD62E/SELE plasmide HDR (h) et le E-Selectin/CD62E/SELE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SELE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SELE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.