Particules Lentivirales d'Activation (h) E-cadherin: sc-400031-LAC

CDH1 code pour l’E-cadhérine, une glycoprotéine d’adhérence cellule–cellule dépendante du calcium qui forme des jonctions d’adhérence grâce à des interactions homophiles et à son association avec les caténines et le cytosquelette d’actine. En stabilisant l’architecture épithéliale et la polarité apico-basale, l’E-cadhérine limite la motilité cellulaire et régule la signalisation dépendante du contact, notamment via des interactions avec les voies Wnt/β-caténine, Hippo/YAP et des récepteurs à activité tyrosine kinase. Une expression altérée de CDH1 ou une localisation jonctionnelle perturbée est largement associée à la plasticité épithélio-mésenchymateuse, à des phénotypes invasifs et au remodelage des barrières tissulaires. CDH1 constitue donc un nœud central pour étudier l’intégrité épithéliale, la signalisation aux jonctions et la biologie tumorale dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales E-cadherin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDH1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales E-cadherin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de E-cadherin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDH1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.