Plasmide Double Nickase (m) dystrophin: sc-420021-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) dystrophin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide dystrophin Double Nickase (m) et le plasmide dystrophin Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dmd. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: dystrophin Antibody (7A10): sc-47760
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) dystrophin | sc-420021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) dystrophin | sc-420021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Dmd** code la dystrophine, une grande protéine d’échafaudage du cytosquelette qui relie le cytosquelette d’actine au complexe des glycoprotéines associées à la dystrophine au niveau du sarcolemme. Cette liaison stabilise les membranes des fibres musculaires pendant la contraction et soutient la mécanotransduction, l’homéostasie ionique ainsi que l’organisation des costamères et l’architecture de la jonction neuromusculaire. La perte ou le dysfonctionnement de la dystrophine perturbe l’intégrité membranaire et modifie la signalisation en aval ainsi que les processus de remodelage inflammatoire dans le muscle squelettique et cardiaque, faisant de **Dmd** un gène central pour modéliser in vivo et dans des myotubes cultivés la biologie pertinente pour les dystrophies musculaires. Les études sur **Dmd** recoupent fréquemment des voies contrôlant le renouvellement de la matrice extracellulaire, la gestion du calcium et la signalisation de réponse au stress dans le muscle strié.
dystrophin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dmd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dmd. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dmd. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dmd.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.