dystrophin Plasmide Double Nickase (m): sc-420021-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- dystrophin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il dystrophin Double Nickase Plasmid (m) e il dystrophin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dmd. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: dystrophin Antibody (7A10): sc-47760
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
dystrophin Plasmide Double Nickase (m) | sc-420021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
dystrophin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene Dmd del topo codifica la distrofina, una grande proteina di impalcatura citoscheletrica che collega il citoscheletro di actina al complesso delle glicoproteine associate alla distrofina a livello del sarcolemma. Questo collegamento stabilizza le membrane delle fibre muscolari durante la contrazione e supporta la meccanotrasduzione, l’omeostasi ionica e l’organizzazione dei costameri e dell’architettura della giunzione neuromuscolare. La perdita o la disfunzione della distrofina compromette l’integrità della membrana e altera i processi di segnalazione a valle e di rimodellamento infiammatorio nel muscolo scheletrico e cardiaco, rendendo Dmd un gene centrale per modellare in vivo e in miotubi in coltura la biologia rilevante per la distrofia muscolare. Gli studi su Dmd si intrecciano comunemente con vie che regolano il turnover della matrice extracellulare, la gestione del calcio e la segnalazione della risposta allo stress nel muscolo striato.
dystrophin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dmd nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dmd. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dmd. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dmd interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.