Dyrk1A Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401928-NIC

DYRK1A codifica a quinase 1A de dupla especificidade regulada por fosforilação em tirosina (Dyrk1A), uma quinase de serina/treonina que sofre autofosforilação e modula redes de fosforilação que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação neuronal e a estabilidade proteica. A Dyrk1A influencia programas transcricionais e cascatas de sinalização por meio da fosforilação de substratos envolvidos na regulação da cromatina, no processamento de RNA e na proteostase, conectando-a a vias de desenvolvimento e de resposta ao estresse. Na biologia humana, alterações na dosagem e na atividade de DYRK1A têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a redes gênicas sensíveis à dosagem, e a desregulação de seus efeitos de sinalização tem sido investigada no contexto de processos proliferativos e sinápticos. Essas características fazem de DYRK1A um alvo frequentemente estudado para dissecar o controle dependente de quinases sobre a expressão gênica e as decisões de destino celular.

Dyrk1A O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DYRK1A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DYRK1A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DYRK1A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DYRK1A interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.