Plasmide CRISPR/Cas9 KO DUOX1 (m): sc-430265

Présentation

Duox1 code la dual oxydase 1 (DUOX1), une enzyme de la famille des NADPH oxydases qui génère du peroxyde d’hydrogène à la surface cellulaire et au sein des voies sécrétoires. Dans les épithéliums et tissus muqueux de souris, les espèces réactives de l’oxygène (ROS) dérivées de DUOX1 contribuent à la signalisation redox, à la défense innée de l’hôte et à la régulation de processus tels que la réparation des plaies et les réponses inflammatoires. L’activité de DUOX1 s’articule avec la signalisation dépendante du calcium et influence des voies en aval sensibles aux signaux oxydatifs, notamment les programmes transcriptionnels associés à MAPK et à NF-κB. Une production de ROS médiée par DUOX1 dérégulée a été impliquée dans des modèles d’inflammation des voies aériennes, de dysfonction de la barrière épithéliale et de biologie du stress oxydant en lien avec des mécanismes de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DUOX1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Duox1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Duox1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Duox1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DUOX1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Duox1 pour l'étude de la signalisation de DUOX1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Duox1 essentiels à la fonction de DUOX1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Duox1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DUOX1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DUOX1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Duox1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DUOX1 plasmide HDR (m) et le DUOX1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Duox1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Duox1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.