DUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430265

概要

Duox1 は、NADPHオキシダーゼファミリーに属する酵素であるデュアルオキシダーゼ1（DUOX1）をコードしており、細胞表面および分泌経路内で過酸化水素を産生します。マウスの上皮や粘膜組織では、DUOX1 由来の活性酸素種（ROS）がレドックスシグナル伝達、自然免疫による宿主防御、ならびに創傷修復や炎症応答などの過程の調節に寄与します。DUOX1 活性はカルシウム依存性シグナル伝達と連動し、MAPK や NF-κB 関連の転写プログラムを含む、酸化シグナルに感受性のある下流経路に影響を及ぼします。DUOX1 を介した ROS 産生の制御破綻は、気道炎症、上皮バリア機能障害、ならびに疾患機序に関連する酸化ストレス生物学のモデルにおいて関与が示唆されています。

DUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDuox1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Duox1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Duox1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DUOX1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DUOX1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Duox1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DUOX1の機能に不可欠なDuox1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Duox1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Duox1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DUOX1 HDRプラスミド（m）および DUOX1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDuox1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDuox1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。