DSCR 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402694-NIC

RCAN1は、DSCR 1（Down syndrome critical region protein 1）をコードしており、カルシウム／カルモジュリン依存性ホスファターゼであるカルシニューリン（PPP3）の内在性阻害因子かつフィードバック制御因子として働きます。DSCR 1は、カルシニューリン依存的な脱リン酸化およびNFAT転写因子の核内局在を調節することで、細胞ストレス応答、アポトーシス、分化に影響するCa2+応答性の遺伝子発現プログラムに関与します。RCAN1はまた、酸化ストレスシグナル伝達やミトコンドリア恒常性とも関連し、神経系および心血管系の生物学に影響を及ぼすことが報告されています。RCAN1/DSCR 1活性の異常は、ダウン症関連の表現型、神経変性、血管機能障害などの病態におけるNFATシグナルの変化と関連づけられており、機序解明のための経路研究における標的としての有用性を支持しています。

DSCR 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RCAN1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RCAN1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RCAN1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RCAN1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。