Plasmide Double Nickase (m) DOT1L1: sc-431556-NIC

Le gène murin *Dot1l* code DOT1L1, une méthyltransférase des histones conservée qui catalyse la méthylation de l’histone H3 sur la lysine 79 (H3K79), reliant l’état de la chromatine à la régulation transcriptionnelle et à des processus associés à la réplication. L’activité de DOT1L1 soutient des programmes d’expression génique impliqués dans la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la spécification des lignages au cours du développement, via un contrôle épigénétique de l’accessibilité de la chromatine. Dans les contextes hématopoïétique et embryonnaire, des altérations de la méthylation H3K79 dépendante de *Dot1l* ont été associées à des réseaux transcriptionnels déréglés et à une différenciation aberrante, ce qui en fait un locus utile pour modéliser des mécanismes épigénétiques pertinents pour la transformation oncogénique et certains phénotypes du développement. *Dot1l* est également étudié dans le cadre du contrôle, médié par la chromatine, de la signalisation inflammatoire et des voies de stabilité du génome.

DOT1L1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dot1l dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dot1l. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dot1l. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dot1l.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.