Dnmt2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420034

概要

Trdmt1はDnmt2をコードしており、Dnmt2は高度に保存されたRNAシトシン-5メチルトランスフェラーゼで、主としてtRNAを修飾します（特にシトシン38位のm5C）。この修飾はtRNAの安定性、翻訳時の解読精度、ならびに細胞のストレス応答に影響します。RNAメチル化の制御を通じて、Dnmt2は翻訳制御や、RNAプロセシングおよびゲノム維持経路と交差するより広範なエピトランスクリプトーム・ネットワークに寄与します。TRDMT1/DNMT2活性の変化は、プロテオスタシスやストレス適応の破綻と関連づけられており、モデル系では腫瘍化に関わる表現型や神経生物学的過程との関連も報告されています。マウスでは、Trdmt1はRNAを介した遺伝子発現制御、細胞恒常性、ならびに環境・代謝ストレッサーに対する状況依存的な応答における役割の観点から、しばしば研究されています。

Dnmt2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTrdmt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Trdmt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Trdmt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dnmt2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dnmt2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Trdmt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dnmt2の機能に不可欠なTrdmt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Trdmt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dnmt2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDnmt2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Trdmt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dnmt2 HDRプラスミド（m）および Dnmt2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTrdmt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTrdmt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。