DNCLI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412128

概要

DYNC1LI1は、微小管に沿ってマイナス端方向への輸送を担う細胞質ダイニン1モーター複合体の中核サブユニットである、細胞質ダイニン1軽中間鎖1（DNCLI1）をコードします。DNCLI1はカーゴ結合とモーター制御に関与し、小胞およびオルガネラ輸送、エンドソーム―リソソームの配置、ゴルジ体の組織化、軸索内の逆行性輸送などの過程を支えます。これらの機能を通じて、DYNC1LI1は細胞極性、有糸分裂紡錘体のダイナミクス、神経細胞の恒常性に影響を及ぼし、ダイニン依存的輸送の障害を神経発達疾患および神経変性疾患の機序と結び付けます。さらに、ダイニン複合体機能の変化は、正確なカーゴ局在に依存するストレス応答や細胞内シグナル伝達を制御する経路とも関連します。

DNCLI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDYNC1LI1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DYNC1LI1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DYNC1LI1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DNCLI1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DNCLI1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DYNC1LI1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DNCLI1の機能に不可欠なDYNC1LI1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DYNC1LI1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DNCLI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDNCLI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DYNC1LI1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DNCLI1 HDRプラスミド（h）および DNCLI1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDYNC1LI1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDYNC1LI1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。