DnaJA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406743

概要

DNAJA4は、Hsp40（DnaJ）共シャペロンファミリーの一員であるDnaJA4をコードしており、未折りたたみ状態のクライアントタンパク質に結合してHsp70のATPase活性を促進し、タンパク質の適切なフォールディング、再フォールディング、ならびに誤折りたたみタンパク質の選別（トリアージ）を促します。これらのシャペロン駆動型の品質管理プロセスを介して、DnaJA4は、細胞ストレス応答やタンパク質代謝回転（ターンオーバー）経路と交差するプロテオスタシス・ネットワークに寄与します。シャペロン活性の制御異常はシグナル伝達タンパク質の安定性や機能に影響し、細胞の生存、分化、ストレス適応を司る経路に波及し得ます。プロテオスタシス能力の変化は、異常なタンパク質折りたたみ、凝集、またはストレスシグナルが病的表現型を支える状況などを含め、疾患生物学に広く関連します。

DnaJA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNAJA4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNAJA4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNAJA4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DnaJA4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DnaJA4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNAJA4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DnaJA4の機能に不可欠なDNAJA4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNAJA4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DnaJA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDnaJA4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNAJA4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DnaJA4 HDRプラスミド（h）および DnaJA4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNAJA4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNAJA4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。