Plasmide Double Nickase (m) DNA pol ε A: sc-422339-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DNA pol ε A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNA pol ε A Double Nickase (m) et le plasmide DNA pol ε A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Pole. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DNA pol ε A Antibody (3C5.1): sc-12728
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DNA pol ε A | sc-422339-NIC | 20 µg | $410.00 |
Pole murin code la sous-unité catalytique A de l’ADN polymérase epsilon, une polymérase réplicative à haute fidélité essentielle à la synthèse du brin directeur pendant la phase S. L’ADN pol ε A agit de concert avec l’hélicase CMG et les complexes de facteurs de réplication pour assurer la progression du réplisome, la coordination du traitement des fragments d’Okazaki et une duplication fidèle du génome. Au-delà de la réplication, Pole contribue à la tolérance aux dommages de l’ADN et aux réponses au stress réplicatif, en interagissant avec les voies de signalisation des points de contrôle qui préservent la stabilité des fourches de réplication. La perturbation de la fonction des polymérases réplicatives est étroitement liée à des phénotypes d’instabilité génomique, largement utilisés pour modéliser les processus mutationnels et des défauts de réplication de l’ADN pertinents pour le cancer dans des systèmes expérimentaux.
DNA pol ε A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pole dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pole. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pole. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pole.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.