DNA pol ε A Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422339-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DNA pol ε AO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase DNA pol ε A (m) e o Plasmídeo Double Nickase DNA pol ε A (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Pole. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DNA pol ε A Anticorpo (3C5.1): sc-12728
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DNA pol ε A Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-422339-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Pole codifica a subunidade catalítica A da DNA polimerase épsilon, uma polimerase replicativa de alta fidelidade essencial para a síntese da fita líder do DNA durante a fase S. A DNA pol ε A coordena-se com a helicase CMG e com complexos de fatores de replicação para sustentar a progressão do replissoma, a coordenação do processamento dos fragmentos de Okazaki e a duplicação precisa do genoma. Para além da replicação, Pole contribui para a tolerância a danos no DNA e para as respostas ao stresse replicativo, interagindo com vias de sinalização de checkpoint que preservam a estabilidade da forquilha de replicação. A disrupção da função de polimerases replicativas está estreitamente ligada a fenótipos de instabilidade genómica, amplamente utilizados para modelar processos mutacionais e defeitos de replicação do DNA relevantes para o cancro em sistemas experimentais.
DNA pol ε A O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Pole em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Pole. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Pole. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Pole interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.