DNA pol ε ACRISPR激活质粒(h): sc-402290-ACT

POLE 编码 DNA 聚合酶 ε（pol ε）的催化性 A 亚基，这是一种高保真复制型聚合酶，对前导链 DNA 合成及 S 期进程至关重要。DNA 聚合酶 ε 参与维持复制叉稳定性，与 CMG 解旋酶复合体协同作用，并通过其内在的 3′→5′ 外切酶校对功能减少复制错误。凭借在 DNA 复制与基因组维护中的作用，POLE 与 DNA 损伤应答信号及复制应激通路相互衔接，从而保护染色体完整性。POLE 功能或调控的异常与突变负荷升高和基因组不稳定表型相关，这些现象常在研究肿瘤相关复制缺陷与 DNA 修复依赖性的工作中被重点探讨。

DNA pol ε A CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性POLE的表达。

DNA pol ε A CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的POLE基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于POLE转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性DNA pol ε A表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的POLE位点，并能够研究内源性位点上依赖于DNA pol ε A的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在POLE表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DNA pol ε A通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。