Plasmide Double Nickase (h) DNA pol δ 4: sc-408268-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DNA pol δ 4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNA pol δ 4 Double Nickase (h) et le plasmide DNA pol δ 4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant POLD4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) DNA pol δ 4 | sc-408268-NIC | 20 µg | $410.00 |
POLD4 code la sous-unité 4 de l’ADN polymérase delta, un composant accessoire de l’holoenzyme ADN polymérase δ qui soutient la réplication chromosomique de l’ADN à haute fidélité et la synthèse du brin retardé. Grâce à ses interactions au sein du replisome, la polymérase δ se coordonne avec la processivité dépendante de PCNA, la maturation des fragments d’Okazaki et la synthèse de réparation de l’ADN lors de la réparation par excision de base et de la réparation des mésappariements. Le bon fonctionnement de POLD4 contribue à la stabilité du génome, à la tolérance au stress réplicatif et à une progression correcte du cycle cellulaire au cours de la phase S. La dérégulation des sous-unités de la polymérase δ et des voies associées à la réplication est fréquemment étudiée dans les travaux portant sur la mutagenèse, l’instabilité chromosomique et les phénotypes de réponse aux dommages de l’ADN associés au cancer.
DNA pol δ 4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POLD4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POLD4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POLD4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POLD4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.