Plasmide Double Nickase (h) Dlx-5: sc-401825-NIC

DLX5 code Dlx-5, un facteur de transcription à homéoboîte qui dirige, au cours du développement, la spécification du destin cellulaire et les programmes de mise en place des structures, avec des rôles majeurs dans la différenciation ostéogénique et la morphogenèse craniofaciale, des membres et de l’oreille interne. Dlx-5 intervient dans des réseaux de régulation transcriptionnelle en aval de voies de signalisation du développement telles que BMP/TGF-β et interagit avec des programmes géniques centrés sur RUNX2 afin de contrôler l’expression de gènes associés à la matrice extracellulaire et à la minéralisation. Des altérations de la dose de DLX5 ou des perturbations de sa régulation ont été associées à des phénotypes de malformations congénitales, et une expression dérégulée de DLX5 a été rapportée dans des contextes de prolifération et de différenciation aberrantes en cancérologie. En tant que régulateur de lignée et de différenciation, DLX5 est fréquemment étudié dans des modèles de développement squelettique, de transitions épithélio-mésenchymateuses et de tissus dérivés de la crête neurale.

Dlx-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DLX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DLX5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DLX5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DLX5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.