Dlx-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401825-NIC

DLX5 codifica o Dlx-5, um fator de transcrição homeobox que orienta a especificação do destino celular e programas de padronização durante o desenvolvimento, com papéis de destaque na diferenciação osteogênica e na morfogênese craniofacial, dos membros e do ouvido interno. O Dlx-5 atua em redes de regulação transcricional a jusante de vias de sinalização do desenvolvimento, como BMP/TGF-β, e interage com programas gênicos centrados em RUNX2 para controlar a expressão de genes associados à matriz extracelular e à mineralização. Alterações na dosagem de DLX5 ou perturbações regulatórias têm sido associadas a fenótipos de malformações congênitas, e a expressão desregulada de DLX5 foi relatada em contextos de proliferação e diferenciação aberrantes na biologia do câncer. Como regulador de linhagem e diferenciação, DLX5 é frequentemente estudado em modelos de desenvolvimento esquelético, transições epitélio–mesênquima e tecidos derivados da crista neural.

Dlx-5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DLX5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DLX5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DLX5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DLX5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.