Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dlx-3: sc-405063-ACT

DLX3 code le facteur de transcription à homéoboîte Dlx-3, un régulateur clé des interactions épithélio-mésenchymateuses qui coordonne des programmes géniques contrôlant la différenciation de l’épiderme, le développement des follicules pileux, l’odontogenèse et la morphogenèse cranio-faciale. Dlx-3 participe à des réseaux transcriptionnels du développement avec d’autres membres de la famille DLX et s’intègre à des signaux tels que BMP et WNT afin de moduler la spécification des lignages et la formation de la barrière. En génétique humaine, une altération de la fonction de DLX3 est associée à des phénotypes de dysplasie ectodermique, dont le syndrome tricho-dento-osseux, reliant son contrôle transcriptionnel à des défauts des cheveux, de l’émail dentaire et de l’homéostasie osseuse. Ces caractéristiques font de DLX3 un nœud pertinent pour étudier les états de la chromatine dépendants de la différenciation, l’utilisation d’activateurs (enhancers) spécifiques des tissus et les circuits de régulation génique dans les kératinocytes et des modèles progéniteurs apparentés.

Dlx-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DLX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dlx-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DLX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DLX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dlx-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DLX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dlx-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dlx-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de DLX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.