DIC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417651
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DIC O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DIC, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DIC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-417651 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O SLC25A10 codifica o transportador mitocondrial de dicarboxilatos (DIC), um transportador da membrana interna que troca malato e succinato por fosfato inorgânico, conectando o fluxo de metabólitos mitocondriais às demandas biossintéticas e redox do citosol. Ao regular a disponibilidade de dicarboxilatos, o DIC influencia a anaplerose, o equilíbrio de precursores gluconeogênicos e lipogênicos e a coordenação do ciclo do TCA com a fosforilação oxidativa. Alterações na atividade do SLC25A10 têm sido associadas à reprogramação metabólica e a respostas ao estresse mitocondrial, tornando-o relevante para o estudo de vias que acoplam a utilização de nutrientes à função mitocondrial. Como membro da família de transportadores mitocondriais, o DIC também oferece uma ferramenta para investigar como restrições de transporte moldam o manejo de ROS e o metabolismo proliferativo em modelos celulares relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DIC (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC25A10 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC25A10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC25A10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DIC.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC25A10 para a investigação da sinalização de DIC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC25A10 críticos para a função DIC
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC25A10 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DIC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DIC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC25A10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DIC Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DIC (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC25A10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC25A10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.